Influence of pulsatilla saponin on proliferation, migrationand invasion of gastric cancer HGC-27 cells and its possible mechanism
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摘要:目的
探讨白头翁皂苷对胃癌细胞HGC-27增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制。
方法采用不同浓度白头翁皂苷(12.5、25.0、50.0 μmol/L)处理人胃癌细胞HGC-27, 分别设为低白头翁皂苷组、中白头翁皂苷组、高白头翁皂苷组，另将正常培养的HGC-27细胞设为对照组。将si-NC、si-circNRIP1、pcDNA、pcDNA-circNRIP1转染至HGC-27细胞，分别设为si-NC组、si-circNRIP1组、pcDNA组、pcDNA-circNRIP1组。向HGC-27细胞中转染pcDNA、pcDNA-circNRIP1, 均加入50.0 μmol/L白头翁皂苷培养，分别记为白头翁皂苷+pcDNA组、白头翁皂苷+pcDNA-circNRIP1组。通过CCK-8法、平板克隆形成实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成和迁移、侵袭能力; 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测环状RNA核受体相互作用蛋白1 (circNRIP1)表达量; 采用蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的蛋白表达情况。
结果对照组、低白头翁皂苷组、中白头翁皂苷组、高白头翁皂苷组细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白水平依次升高，细胞克隆形成数量、迁移数量、侵袭数量依次减少, N-cadherin蛋白水平、circNRIP1表达量依次降低，差异均有统计学意义(P < 0.05); pcDNA-circNRIP1组circNRIP1表达量高于pcDNA组, si-circNRIP1组circNRIP1表达量低于si-NC组，差异有统计学意义(P < 0.05); si-circNRIP1组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平高于si-NC组, N-cadherin蛋白水平低于si-NC组，细胞克隆形成数量、迁移数量和侵袭数量少于si-NC组，差异均有统计学意义(P < 0.05); 白头翁皂苷+pcDNA-circNRIP1组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平低于白头翁皂苷+pcDNA组, N-cadherin蛋白水平高于白头翁皂苷+pcDNA组，细胞克隆形成数量、迁移数量和侵袭数量多于白头翁皂苷+pcDNA组，差异有统计学意义(P < 0.05)。
结论白头翁皂苷可抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭活性且呈现浓度依赖性，其作用机制或与下调circNRIP1表达有关。
Abstract:ObjectiveTo explore the influence of pulsatilla saponin on proliferation, migration and invasion of gastric cancer HGC-27 cells and its possible mechanism.
MethodsHuman gastric cancer HGC-27 cells were treated with different doses of pulsatilla saponin (12.5, 25.0, 50.0 μmol/L) and named as low-dose pulsatilla saponin group, medium-dose pulsatilla saponin group and high-dose pulsatilla saponin group, and the normal cultured HGC-27 cells were named as control group. The si-NC, si-circNRIP1, pcDNA and pcDNA-circNRIP1 were transfected into HGC-27 cells, and were named as si-NC group, si-circNRIP1 group, pcDNA group and pcDNA-circNRIP1 group respectively. HGC-27 cells were transfected with pcDNA and pcDNA-circNRIP1 and cultured with 50.0 μmol/L pulsatilla saponin, and were named as pulsatilla saponin plus pcDNA group and pulsatilla saponin plus pcDNA-circNRIP1 group respectively. CCK-8 assay, colony formation assay and Transwell assay were used to detect the proliferation, clone formation and migration, and invasion respectively; quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to detect the expression of circular RNA nuclear receptor interacting protein 1 (circNRIP1); Western blot was used to detect the expressions of E-cadherin and N-cadherin proteins.
ResultsIn the control group, low-dose pulsatilla saponin group, medium-dose pulsatilla saponin group and high-dose pulsatilla saponin group, the inhibition rates of cell proliferation and the levels of E-cadherin protein significantly increased gradually, the number of cell clone formation, migration and invasion significantly decreased gradually, and the expressions of N-cadherin protein and circNRIP1 significantly decreased gradually (P < 0.05); the expression level of circNRIP1 in the pcDNA-circNRIP1 group was significantly higher than that in the pcDNA group, while the expression level of circNRIP1 in the si-circNRIP1 group was significantly lower than thatin the si-NC group (P < 0.05); the inhibition rate of cell proliferation and level of E-cadherin protein in the si-circNRIP1 group were significantly higher than those in the si-NC group, while the level of N-cadherin protein and the number of cell clone formation, migration and invasion were significantly lower than those in the si-NC group (P < 0.05); the inhibition rate of cell proliferation and level of E-cadherin protein in the pulsatilla saponin plus pcDNA-circNRIP1 group were significantly lower than those in the pulsatilla saponin plus pcDNA group, while the level of N-cadherin protein and the number of cell clone formation, migration and invasion were significantly higher than those in the pulsatilla saponin plus pcDNA group (P < 0.05).
ConclusionPulsatilla saponin can inhibit the proliferation, migration and invasion of gastric cancer cells in a dose-dependent manner, and its mechanism may be associated with down-regulation of circNRIP1 expression.
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胃癌是临床常见的恶性肿瘤，目前多采用手术结合放化疗方式进行治疗，但部分患者因产生耐药性或放射抵抗性而疗效欠佳，故寻找安全有效的治疗药物对改善患者预后具有重要意义[1-2]。相关研究[3-4]将中草药用于胃癌的治疗中，发现其可通过影响胃癌细胞生物学行为而减缓胃癌发展进程。白头翁属于毛茛科植物白头翁的干燥根，具有抗炎、抗肿瘤作用。研究[5]表明，白头翁皂苷类化合物具有抗肿瘤作用，但白头翁皂苷对胃癌细胞生物学行为的影响尚不明确。环状RNA(circRNA)是由5′端与3′端以共价键结合形成的闭合RNA分子，在胃癌等肿瘤中表达异常且具有高稳定性。环状RNA核受体相互作用蛋白1 (circNRIP1)作为circRNA成员之一，能通过调控细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)以及Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路介导肿瘤细胞的发展[6]。研究[7]表明，胃癌细胞中circNRIP1表达水平增高，下调circNRIP1可促进胃癌细胞凋亡。另有研究[8]指出, circNRIP1高表达与胃癌的转移潜力和复发风险密切相关。此外, circNRIP1可通过调控葡萄糖代谢而参与胃癌发生过程[9]。本研究探讨白头翁皂苷对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并分析其机制是否与调控circNRIP1有关，以期为胃癌的临床治疗提供新的方向与思路。
1. 材料与方法
1.1 材料与试剂
人胃癌细胞HGC-27购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库; 白头翁皂苷购自南京春秋生物科技有限公司(纯度≥98%); DMEM培养液与胎牛血清购自美国Gibco公司; Trizol试剂由上海源叶生物公司提供; LipofectamineTM3000 Transfection Reagent转染试剂由北京普利莱公司提供; 反转录和荧光定量聚合酶链反应(PCR)试剂盒购自北京天根生化; pcDNA、pcDNA-circNRIP1购自上海吉满生物; si-NC、si-circNRIP1由广州锐博生物公司提供; 兔抗人E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)抗体均由北京普利莱基因技术有限公司提供; CCK-8试剂、Transwell小室、Matrigel基质胶均由北京索莱宝科技有限公司提供; GAPDH抗体、带有辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)二抗均购于上海翌圣生物公司。
1.2 方法
1.2.1 实验分组:
将HGC-27细胞种植于6孔细胞培养板中，加入不同浓度白头翁皂苷(12.5、25.0、50.0 μmol/L)培养24 h[10], 分别设为低白头翁皂苷组、中白头翁皂苷组、高白头翁皂苷组，另将正常培养的HGC-27细胞设为对照组。采用脂质体转染法将si-NC、si-circNRIP1转染至HGC-27细胞，分别设为si-NC组、si-circNRIP1组。采用脂质体转染法将pcDNA-circNRIP1、pcDNA转染至HGC-27细胞，分别设为pcDNA-circNRIP1组、pcDNA组。分别向HGC-27细胞中转染pcDNA、pcDNA-circNRIP1, 然后将50.0 μmol/L白头翁皂苷加至细胞中培养24 h, 分别记为白头翁皂苷+pcDNA组、白头翁皂苷+pcDNA-circNRIP1组。
1.2.2 CCK-8法检测细胞增殖能力:
将收集好的各组HGC-27细胞置入96孔板中，每孔均加入CCK-8溶液10 μL, 置入恒温培育箱中持续培育2 h, 使用酶标仪检测各孔450 nm处光密度(OD)值并记录数据。
1.2.3 平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力:
将各组HGC-27细胞以每孔500个分别接种于6孔板中，继续培育至出现肉眼可见的细胞克隆团，弃培养基并加入500 μL甲醇，持续固定20 min后加入浓度1%的结晶紫染色液400 μL, 持续染色15 min, 拍照并观察细胞克隆情况。
1.2.4 Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力:
① 侵袭实验。收集各组HGC-27细胞，在加入稀释的Matrigel基质胶的上室进行接种(每孔1×105个)，并将600 μL血清培养液置入其下室，共同置入培育箱，持续48 h后，弃去培养液，加入4%浓度的多聚甲醛完成固定，时间20 min, 然后用1%浓度结晶紫染色液染色10 min, 再用显微镜观察细胞侵袭情况。②迁移实验。收集各组HGC-27细胞接种于上室(每孔1×105个)，后续实验步骤同侵袭实验。
1.2.5 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circNRIP1表达:
向各组HGC-27细胞中加入1 mL Trizol试剂，有效提取细胞总DNA, 各组DNA浓度测定均采用紫外分光光度计完成。建立反转录体系，分别为5×g DNA Buffer 2 μL, 2 μL 10×King RT Buffer, 1 μL FastKing RT Enzyme Mix, 2 μL FQ-RT Primer Mix, 2 μg RNA, 并将20 μL RNase-Free ddH2O作为补足体系。qRT-PCR扩增操作在cDNA模板基础上进行。使用罗氏LightCycler480荧光定量PCR仪检测circNRIP1相对表达量。
1.2.6 蛋白质印迹法(Western blot)检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达:
将RIPA裂解液分别加入各组HGC-27细胞中，提取细胞总蛋白后，采用二喹啉甲酸(BCA)方法分别检测相关蛋白浓度。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法对40 μg蛋白进行电泳操作，并将分离好的蛋白凝胶转至聚偏氟乙烯(PVDF)膜，加入5%浓度的脱脂牛奶进行封闭操作，持续时间2 h; 将E-cadherin一抗(1∶1 000稀释)、N-cadherin一抗(1∶1 000稀释)和内参GAPDH抗体(1∶3 000稀释)与PVDF膜共同在4 ℃环境下孵育一夜，再将膜继续与二抗(1∶5 000稀释)在37 ℃恒温环境中孵育2 h, 应用Quantity One软件对蛋白条带进行定量分析。
1.3 统计学分析
采用SPSS 21.0统计学软件分析数据，计量资料以(x±s)表示, 2组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析, P < 0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 白头翁皂苷对HGC-27细胞增殖能力和克隆形成能力的影响
对照组、低白头翁皂苷组、中白头翁皂苷组、高白头翁皂苷组细胞增殖抑制率依次升高，细胞克隆形成数量依次减少，差异均有统计学意义(P < 0.05)。见表 1、图 1。
表 1 4组细胞增殖抑制率和细胞克隆形成数量比较(x±s)组别 n 细胞增殖抑制率/% 细胞克隆形成数量/个 对照组 9 0±0 103.89±6.92 低白头翁皂苷组 9 10.50±1.06* 85.56±3.50* 中白头翁皂苷组 9 23.51±1.29*# 63.11±2.85*# 高白头翁皂苷组 9 44.71±2.37*#△ 42.44±2.31*#△ 与对照组比较, *P < 0.05; 与低白头翁皂苷组比较, #P < 0.05; 与中白头翁皂苷组比较, △P < 0.05。 2.2 白头翁皂苷对HGC-27细胞迁移、侵袭能力的影响
对照组、低白头翁皂苷组、中白头翁皂苷组、高白头翁皂苷组细胞迁移数量、侵袭数量依次减少, N-cadherin蛋白表达依次降低, E-cadherin蛋白表达依次升高，差异均有统计学意义(P < 0.05), 见图 2、表 2。
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图 2 4组细胞Transwell实验结果和E-cadherin、N-cadherin蛋白表达情况A: Transwell迁移和侵袭实验结果(结晶紫染色法，放大200倍); B: E-cadherin、N-cadherin蛋白的Western blot检测结果。表 2 4组细胞迁移、侵袭数量和E-cadherin、N-cadherin蛋白表达情况比较(x±s)组别 n 迁移数量/个 侵袭数量/个 E-钙黏蛋白 N-钙黏蛋白 对照组 9 221.56±11.92 163.00±7.27 0.22±0.03 0.89±0.06 低白头翁皂苷组 9 182.00±7.42* 132.67±5.12* 0.38±0.04* 0.64±0.05* 中白头翁皂苷组 9 149.78±6.41*# 98.00±4.35*# 0.56±0.06*# 0.43±0.04*# 高白头翁皂苷组 9 105.11±5.13*#△ 70.33±3.53*#△ 0.77±0.06*#△ 0.21±0.02*#△ 与对照组比较, *P < 0.05; 与低白头翁皂苷组比较, #P < 0.05; 与中白头翁皂苷组比较, △P < 0.05。 2.3 白头翁皂苷对HGC-27细胞中circNRIP1表达的影响
对照组、低白头翁皂苷组、中白头翁皂苷组、高白头翁皂苷组circNRIP1表达量依次降低，差异均有统计学意义(P < 0.05), 见表 3。
表 3 4组细胞circNRIP1表达量比较(x±s)组别 n circNRIP1 对照组 9 1.00±0 低白头翁皂苷组 9 0.71±0.05* 中白头翁皂苷组 9 0.48±0.05*# 高白头翁皂苷组 9 0.22±0.02*#△ circNRIP1: 环状RNA核受体相互作用蛋白1。与对照组比较, *P < 0.05; 与低白头翁皂苷组比较, #P < 0.05; 与中白头翁皂苷组比较, △P < 0.05。 2.4 过表达和抑制circNRIP1后circNRIP1转染效率检测结果
与pcDNA组比较, pcDNA-circNRIP1组circNRIP1表达量升高，差异有统计学意义(P < 0.05); 与si-NC组比较, si-circNRIP1组circNRIP1表达量降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。见表 4。
表 4 各组circNRIP1转染效率检测结果比较(x±s)组别 n circNRIP1 pcDNA组 9 1.00±0 pcDNA-circNRIP1组 9 2.71±0.10* si-NC组 9 1.00±0 si-circNRIP1组 9 0.46±0.05# 与pcDNA组比较, *P < 0.05; 与si-NC组比较, #P < 0.05。 2.5 抑制circNRIP1对HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭的影响
si-circNRIP1组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平高于si-NC组, N-cadherin蛋白水平低于si-NC组，细胞克隆形成数量、迁移数量和侵袭数量少于si-NC组，差异均有统计学意义(P < 0.05), 见图 3、表 5。
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图 3 抑制circNRIP1对HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响A: 平板克隆形成实验结果; B: Transwell迁移和侵袭实验结果(结晶紫染色法，放大200倍); C: E-cadherin、N-cadherin的Western blot检测结果。表 5 抑制circNRIP1对HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭相关指标的影响(x±s)组别 n 细胞增殖抑制率/% 细胞克隆形成数量/个 迁移数量/个 侵袭数量/个 E-cadherin蛋白水平 N-cadherin蛋白水平 si-NC组 9 0±0 102.56±9.27 218.00±10.31 165.00±11.22 0.21±0.03 0.85±0.07 si-circNRIP1组 9 36.38±2.15* 53.11±2.88* 125.00±8.03* 85.78±5.53* 0.64±0.06* 0.32±0.03* 与si-NC组比较, *P < 0.05。 2.6 过表达circNRIP1对白头翁皂苷处理的HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭的影响
白头翁皂苷+pcDNA-circNRIP1组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平低于白头翁皂苷+pcDNA组, N-cadherin蛋白水平高于白头翁皂苷+pcDNA组，细胞克隆形成数量、迁移数量和侵袭数量多于白头翁皂苷+pcDNA组，差异有统计学意义(P < 0.05), 见图 4、表 6。
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图 4 过表达circNRIP1对白头翁皂苷处理的HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭的影响A: 平板克隆形成实验结果; B: Transwell迁移和侵袭实验结果(结晶紫染色法，放大200倍); C: E-cadherin、N-cadherin的Western blot检测结果。表 6 过表达circNRIP1对白头翁皂苷处理的HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭相关指标的影响(x±s)组别 n 细胞增殖抑制率/% 细胞克隆形成数量/个 迁移数量/个 侵袭数量/个 E-cadherin蛋白水平 N-cadherin蛋白水平 白头翁皂苷+pcDNA组 9 44.36±1.94 41.89±3.14 106.44±7.24 72.00±4.97 0.76±0.07 0.19±0.03 白头翁皂苷+pcDNA-circNRIP1组 9 15.53±1.20* 79.44±2.71* 162.11±9.47* 114.56±6.24* 0.41±0.05* 0.53±0.05* 与白头翁皂苷+pcDNA组比较, *P < 0.05。 3. 讨论
既往研究[11]显示, circRNA在胃癌组织和相关细胞系中异常表达，且对胃癌细胞生物学行为产生一定影响，例如环状RNA人抗原R(circ-HuR, hsa_circ_0049027)在胃癌组织和细胞系中表达下调，上调其表达则可抑制胃癌细胞生长、侵袭和转移，机制可能是circ-HuR与CCHC型锌指核酸结合蛋白(CNBP)相互作用并抑制人抗原R(HuR)表达，进而抑制肿瘤进展。胃癌组织和患者血清中的环状RNA SH3结构域激酶结合蛋白1(circSHKBP1, hsa_circ_0000936)表达均增加，且其与较高的TNM分期和较低的存活率有关, circSHKBP1过表达可促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭、血管生成，并充当微小RNA-582-3p(miR-582-3p)的海绵分子增加HuR表达，还可与热休克蛋白90(HSP90)结合，抑制HSP90泛素化，促进胃癌发展[12]。
从天然植物中提取的活性成分如齐墩果酸具有抗胃癌作用，其机制可能与调控相关信号通路表达有关[13]。研究[14]显示，白头翁皂苷能抑制肺癌细胞增殖并促进细胞凋亡。另有研究[15]报道，白头翁皂苷可抑制结直肠癌细胞增殖及糖酵解。本研究结果显示，随着白头翁皂苷浓度的升高，胃癌细胞增殖抑制率升高，细胞克隆形成数量减少，提示白头翁皂苷可抑制胃癌细胞增殖且具有浓度依赖性。E-cadherin、N-cadherin为上皮-间质转化(EMT)相关标志物，若两者表达失调，可促进EMT, 进而促进细胞迁移与侵袭[16-17]。本研究发现，白头翁皂苷以浓度依赖性方式抑制胃癌细胞迁移与侵袭，并上调E-cadherin蛋白表达和下调N-cadherin蛋白表达，提示白头翁皂苷可在一定程度上抑制胃癌细胞迁移与侵袭活性。
circNRIP1在胃癌组织或细胞系中表达水平升高，敲低circNRIP1可抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)表达，微小RNA-149-5p(miR-149-5p)过表达可减弱circNRIP1对胃癌细胞生物学行为的影响，同时circNRIP1可充当miR-149-5p海绵分子而影响AKT1表达，进而促进胃癌发生与发展[8]。circNRIP1在抗紫杉醇(PTX)的卵巢癌组织和细胞中高表达，沉默circNRIP1可抑制卵巢癌细胞PTX抗性, circNRIP1可充当微小RNA-211-5p(miR-211-5p)海绵分子，抑制miR-211-5p表达可减弱沉默circNRIP1对卵巢癌细胞PTX抗性的抑制作用, miR-211-5p靶向结合同源框C8(HOXC8), HOXC8过表达可减弱miR-211-5p对卵巢癌细胞PTX抗性的抑制作用，circNRIP1、miR-211-5p可共同调节HOXC8表达[18]。circNRIP1在宫颈癌组织、细胞中表达上调，其表达与淋巴血管间隙浸润相关，可促进宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭，微小RNA-629-3p(miR-629-3p)通过调节蛋白酪氨酸磷酸酶4A1(PTP4A1)、ERK1/2抑制宫颈癌细胞增殖与转移, circNRIP1可通过充当miR-629-3p的海绵分子而调节PTP4A1/ERK1/2通路, circNRIP1可能成为宫颈癌的潜在治疗靶点[19]。本研究结果显示，经白头翁皂苷处理后，胃癌细胞circNRIP1表达量降低，提示白头翁皂苷可能通过抑制circNRIP1而发挥抗胃癌进展作用。本研究进一步验证circNRIP1可否作为白头翁皂苷治疗胃癌的潜在靶点，结果显示，抑制circNRIP1表达可减弱胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力，而过表达circNRIP1可拮抗白头翁皂苷对胃癌细胞生长与转移的抑制作用。由此提示，白头翁皂苷对circNRIP1表达具有调控作用，并通过这一机制降低胃癌细胞生长与转移活性。
综上所述，白头翁皂苷对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭活性具有明显抑制作用且呈现浓度依赖性，其作用机制与抑制circNRIP1表达有关。circNRIP1或可成为白头翁皂苷治疗胃癌的潜在靶点，这为白头翁皂苷对胃癌调控机制的研究提供了一定的理论依据。
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图 2 4组细胞Transwell实验结果和E-cadherin、N-cadherin蛋白表达情况
A: Transwell迁移和侵袭实验结果(结晶紫染色法，放大200倍); B: E-cadherin、N-cadherin蛋白的Western blot检测结果。
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图 3 抑制circNRIP1对HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响
A: 平板克隆形成实验结果; B: Transwell迁移和侵袭实验结果(结晶紫染色法，放大200倍); C: E-cadherin、N-cadherin的Western blot检测结果。
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图 4 过表达circNRIP1对白头翁皂苷处理的HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭的影响
A: 平板克隆形成实验结果; B: Transwell迁移和侵袭实验结果(结晶紫染色法，放大200倍); C: E-cadherin、N-cadherin的Western blot检测结果。
表 1 4组细胞增殖抑制率和细胞克隆形成数量比较(x±s)
组别 n 细胞增殖抑制率/% 细胞克隆形成数量/个 对照组 9 0±0 103.89±6.92 低白头翁皂苷组 9 10.50±1.06* 85.56±3.50* 中白头翁皂苷组 9 23.51±1.29*# 63.11±2.85*# 高白头翁皂苷组 9 44.71±2.37*#△ 42.44±2.31*#△ 与对照组比较, *P < 0.05; 与低白头翁皂苷组比较, #P < 0.05; 与中白头翁皂苷组比较, △P < 0.05。 
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表 2 4组细胞迁移、侵袭数量和E-cadherin、N-cadherin蛋白表达情况比较(x±s)
组别 n 迁移数量/个 侵袭数量/个 E-钙黏蛋白 N-钙黏蛋白 对照组 9 221.56±11.92 163.00±7.27 0.22±0.03 0.89±0.06 低白头翁皂苷组 9 182.00±7.42* 132.67±5.12* 0.38±0.04* 0.64±0.05* 中白头翁皂苷组 9 149.78±6.41*# 98.00±4.35*# 0.56±0.06*# 0.43±0.04*# 高白头翁皂苷组 9 105.11±5.13*#△ 70.33±3.53*#△ 0.77±0.06*#△ 0.21±0.02*#△ 与对照组比较, *P < 0.05; 与低白头翁皂苷组比较, #P < 0.05; 与中白头翁皂苷组比较, △P < 0.05。
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表 3 4组细胞circNRIP1表达量比较(x±s)
组别 n circNRIP1 对照组 9 1.00±0 低白头翁皂苷组 9 0.71±0.05* 中白头翁皂苷组 9 0.48±0.05*# 高白头翁皂苷组 9 0.22±0.02*#△ circNRIP1: 环状RNA核受体相互作用蛋白1。与对照组比较, *P < 0.05; 与低白头翁皂苷组比较, #P < 0.05; 与中白头翁皂苷组比较, △P < 0.05。
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表 4 各组circNRIP1转染效率检测结果比较(x±s)
组别 n circNRIP1 pcDNA组 9 1.00±0 pcDNA-circNRIP1组 9 2.71±0.10* si-NC组 9 1.00±0 si-circNRIP1组 9 0.46±0.05# 与pcDNA组比较, *P < 0.05; 与si-NC组比较, #P < 0.05。
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表 5 抑制circNRIP1对HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭相关指标的影响(x±s)
组别 n 细胞增殖抑制率/% 细胞克隆形成数量/个 迁移数量/个 侵袭数量/个 E-cadherin蛋白水平 N-cadherin蛋白水平 si-NC组 9 0±0 102.56±9.27 218.00±10.31 165.00±11.22 0.21±0.03 0.85±0.07 si-circNRIP1组 9 36.38±2.15* 53.11±2.88* 125.00±8.03* 85.78±5.53* 0.64±0.06* 0.32±0.03* 与si-NC组比较, *P < 0.05。
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表 6 过表达circNRIP1对白头翁皂苷处理的HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭相关指标的影响(x±s)
组别 n 细胞增殖抑制率/% 细胞克隆形成数量/个 迁移数量/个 侵袭数量/个 E-cadherin蛋白水平 N-cadherin蛋白水平 白头翁皂苷+pcDNA组 9 44.36±1.94 41.89±3.14 106.44±7.24 72.00±4.97 0.76±0.07 0.19±0.03 白头翁皂苷+pcDNA-circNRIP1组 9 15.53±1.20* 79.44±2.71* 162.11±9.47* 114.56±6.24* 0.41±0.05* 0.53±0.05* 与白头翁皂苷+pcDNA组比较, *P < 0.05。
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1. 韩明，张梦圆，郑沁薇，张楠，李富龙，方盛泉. 中药调控circRNAs及相关ceRNA网络治疗胃癌研究进展. 上海中医药杂志. 2024(04): 86-91 . 
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