Expression and significance of Tribbles 3 and microRNA-1827 in colorectal cancer
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摘要:目的
探讨假性蛋白激酶3(Trib3)、微小RNA-1827(miR-1827)在结直肠息肉和结直肠癌中的表达及意义。
方法选取97例结直肠癌患者癌组织作为结直肠癌组, 选取同期86例结直肠息肉患者息肉组织作为息肉组，选取同期行结直肠镜检查的92例健康体检者正常结直肠黏膜组织作为对照组。采用免疫组织化学法检测不同组织中Trib3表达水平，采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测不同组织中miR-1827表达水平; 分析Trib3、miR-1827表达水平与结直肠息肉和结直肠癌临床病理特征的关系; 分析结直肠息肉组织及结直肠癌组织中Trib3与miR-1827的相关性; 采用多因素COX回归分析探讨影响结直肠息肉和结直肠癌患者预后的因素。
结果结直肠癌组Trib3高表达比率高于息肉组和对照组, miR-1827水平低于息肉组和对照组; 息肉组Trib3高表达比率高于对照组, miR-1827水平低于对照组; 上述组间差异均有统计学意义(P < 0.01)。Trib3、miR-1827表达水平与结直肠息肉患者息肉直径、组织病理学分型、息肉数目有相关性(P < 0.01)。Trib3、miR-1827表达水平与结直肠癌患者肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、分化程度有相关性(P < 0.05)。Trib3、miR-1827在结直肠息肉组织及结直肠癌组织中均呈负相关(r=-0.349、-0.397, P < 0.05)。Trib3是结直肠息肉患者治疗无效的独立危险因素(P < 0.05), miR-1827是结直肠息肉患者治疗无效的保护因素(P < 0.05)。Trib3、临床分期是结直肠癌患者死亡的独立危险因素(P < 0.05), miR-1827是结直肠癌患者死亡的保护因素(P < 0.05)。
结论Trib3、miR-1827表达水平在结直肠黏膜组织癌变进程中分别上调和下调，检测二者表达变化可监测结直肠息肉恶变过程，进而早期预防结直肠癌病变。
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关键词:
- 结直肠癌 /
- 结直肠息肉 /
- 假性蛋白激酶3 /
- 微小RNA-1827 /
- 相关性
Abstract:ObjectiveTo investigate the expressions and significance of Tribbles 3 (Trib3) and microRNA-1827 (miR-1827) in colorectal polyps and colorectal cancer.
MethodsThe cancer tissues of 97 patients with colorectal cancer were selected as colorectal cancer group, the polyp tissues of 86 patients with colorectal polyps in the same period were selected as polyp group, and the normal colorectal mucosal tissues of 92 healthy people with colorectal endoscopy in the same period were selected as control group. The expressions of Trib3 in different tissues were detected by immunohistochemistry, and real-time fluorescent quantitative PCR (qRT-PCR) method was used to detect the expression level of miR-1827 in different tissues; the relationships of the Trib3 and miR-1827 levels with the clinicopathological characteristics of colorectal polyps and colorectal cancer were analyzed; the correlations between Trib3 and miR-1827 in colorectal polyps and colorectal cancer tissues were analyzed; the multivariate COX regression analysis was used to explore the prognostic factors in patients with colorectal polyps or colorectal cancer.
ResultsThe high expression rate of Trib3 in the colorectal cancer group was higher than that in the polyp group and the control group, while the level of miR-1827 was lower than that in the polyp group and the control group; the high expression rate of Trib3 in the polyp group was higher than that in the control group, while the level of miR-1827 was lower than that in the control group; the between-group differences mentioned above were statistically significant (P < 0.01). The expression levels of Trib3 and miR-1827 were correlated with the polyp diameter, histopathological types and the number of polyps in patients with colorectal polyps (P < 0.01). The expression levels of Trib3 and miR-1827 were correlated with the tumor diameter, clinical staging, lymph node metastasis and degree of differentiation in patients with colorectal cancer (P < 0.05). Trib3 was negatively correlated with miR-1827 in both colorectal polyps and colorectal cancer tissues (r=-0.349, -0.397, P < 0.05). Trib3 was an independent risk factor for ineffective treatment of colorectal polyps (P < 0.05), and miR-1827 was a protective factor for ineffective treatment of colorectal polyps (P < 0.05). Trib3 and clinical staging were the independent risk factors for death in patients with colorectal cancer (P < 0.05), and miR-1827 was a protective factor for death in patients with colorectal cancer (P < 0.05).
ConclusionThe expression levels of Trib3 and miR-1827 are up-regulated and down-regulated respectively in the carcinogenesis process of colorectal mucosal tissues, the detection on expression changes of the two indexes can monitor the malignant process of colorectal polyps, and carry out the early prevention of colorectal cancer.
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Keywords:
- colorectal cancer /
- colorectal polyps /
- Tribbles 3 /
- microRNA-1827 /
- correlation
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肾结石是泌尿外科的常见病和多发病。直径大于2 cm的肾结石的治疗策略主要是体外冲击波碎石、经皮肾镜碎石取石术和逆行肾内输尿管软镜碎石术(RIRS)[1-2]。体外冲击波碎石疗效不确切，经皮肾镜碎石取石术的清石率较高，但手术风险也较高。RIRS治疗肾结石的创伤小、手术风险低，但清石率相对较低[3]。目前, RIRS联合可弯曲负压吸引鞘在临床上有广泛应用[4]。本研究观察输尿管软镜联合可弯曲负压吸引鞘治疗肾结石的疗效，现报告如下。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
选取2020年1月—2022年8月本院肾结石患者59例，根据手术方式的不同分为RIRS组和联合组。RIRS组28例，女10例，男18例，年龄25~67岁，平均(49.25±13.28)岁。联合组31例，女16例，男15例，年龄21~70岁，平均(50.39±13.73)岁。2组患者性别和年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本院医学伦理委员会批准本研究，手术前患者或家属签署知情同意书。纳入标准: 影像学检查确诊肾结石者; 肾结石直径2~3 cm者; 符合手术指征者。排除标准: ①合并重要脏器器质性病变者; ②肾结核患者; ③凝血功能异常者; ④脊柱畸形或不能耐受插管全身麻醉患者; ⑤结石>3 cm或 < 2 cm者。
1.2 治疗方法
RIRS组患者行插管全身麻醉，入室后取截石位，进行常规消毒和铺单。采用输尿管镜进入膀胱，置入异物钳，将预置双J管拔除; 再次进镜，置入超滑导丝，并在导丝引导下进入输尿管开口，继续上行至肾盂; 退出输尿管镜，保留超滑导丝，并在导丝引导下置入输尿管软镜鞘; 软镜通过输尿管软镜鞘进入肾盂，检查肾盂肾盏，找到结石后，插入钬激光光纤，将结石粉碎; 通过取石网篮将较大的结石碎片取出后，留置双J管1根。术后第1天和第4周，拍摄腹部平片检查结石残留情况。
联合组患者行插管全身麻醉，入室后取截石位，进行常规消毒和铺单。采用输尿管镜进入膀胱，置入异物钳，将预置双J管拔除; 再次进镜，置入超滑导丝，并在导丝引导下进入输尿管开口，继续上行至肾盂; 退出输尿管镜，保留超滑导丝，并在导丝引导下置入可弯曲负压吸引鞘; 将负压吸引器连接至负压吸引鞘，压力设置为150~200 mmHg, 同时使用连续性压力泵进行灌注，流速设置为150~200 mL/min; 软镜引入，检查肾盂肾盏，找到结石后，插入钬激光光纤，将结石粉碎; 结石碎片通过负压吸引鞘吸出后，留置双J管1根。术后第1天和第4周，拍摄腹部平片检查结石残留情况。
1.3 评价标准
① 比较2组患者的结石清除率，以无结石残留或碎石末≤3 mm为清石成功。②比较2组患者手术时间、术中失血量和术后住院时间。术中失血量通过碱羟高铁血红素(AHD-575)法计算。③比较2组患者术后血尿持续时间和术后感染发生率。
1.4 统计学分析
采用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析。计量资料以(x±s)表示，组间数据比较行t检验。计数资料以例数(n)和百分比(%)表示，组间数据比较行χ2检验。P < 0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 2组患者一般资料比较
2组患者结石大小、并发症发生情况、尿路感染情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表 1。
表 1 2组患者一般资料比较(x±s)组别 结石大小/mm 并发症 尿路感染 无 伴肾积水 伴肾功能损害 无 有 RIRS组(n=28) 24.53±2.58 6 18 4 22 6 联合组(n=31) 24.09±2.71 7 20 4 27 4 2.2 2组患者手术情况比较
RIRS组手术时间、术中失血量大于联合组，差异有统计学意义(P < 0.05)。见表 2。
表 2 2组患者手术情况比较(x±s)组别 手术时间/min 术中失血量/mL 术后住院时间/d RIRS组(n=28) 72.50±11.38 54.10±2.59 4.21±0.83 联合组(n=31) 56.84±9.65* 40.94±8.73* 4.16±0.73 与RIRS组比较, *P < 0.05。 2.3 2组患者结石清除率比较
联合组即刻清石率、术后4周清石率分别为77.42%(24/31)、96.77%(30/31)，高于RIRS组的7.14%(2/28)、71.42%(20/28)，差异有统计学意义(P < 0.05)。
2.4 2组患者术后并发症比较
RIRS组和联合组均无术后大出血，但联合组术后血尿持续时间更短，术后感染发生率更低，差异有统计学意义(P < 0.05)。见表 3。
表 3 2组术后血尿持续时间及感染率比较(x±s)[n(%)]组别 术后血尿持续时间/d 术后感染 RIRS组(n=28) 10.03±3.05 5(17.86) 联合组(n=31) 6.06±1.86* 1(3.23)* 与对照组比较, *P < 0.05。 3. 讨论
在中国，上尿路结石的发病率显著高于下尿路结石，而肾结石的发病率为4%~10%, 其中南方地区的发病率则高达13%[5]。临床上对于直径 < 2 cm的肾结石，大多数医师会选择RIRS。RIRS是通过人体自然腔道进行碎石手术，因此整个手术过程更加接近无创要求[6]。对于直径≥2 cm的肾结石, RIRS的清石率不高，临床开展受到一定的限制[7]。
RIRS手术过程中，肾盂肾盏的黏膜受损，毛细血管破损，血液进入灌注液，从而引起视野模糊。血凝块也会掩盖较大的结石碎块，导致结石残余的可能性增加。此外，碎石过程中产生的碎石末会导致“暴风雪”现象，造成碎石困难[8]。可弯曲负压吸引鞘可以将肾盂肾盏内的血液及时吸除，避免形成血块。同时，结石碎末在负压的作用下，可以快速被吸出，既增加术野的清晰度，保证碎石的效率，又减少了取石时间，降低残石的发生率。本研究中，联合组即刻清石率为77.42%, 显著高于RIRS组的7.14%; 术后4周清石率方面, RIRS组为71.42%, 显著低于联合组的96.77%; RIRS组手术时间、术中失血量显著大于联合组。
普通的RIRS手术在碎石过程中，由于其相对封闭的环境，会引起肾盂灌注压的增加，这样必然会促进包裹在感染性肾结石内的细菌释放到灌注液中，进入血液而导致感染。如果感染不能及时被控制，则有发生尿源性脓毒血症，甚至感染性休克的风险[9]。研究[10-11]显示, RIRS术后感染发生率与肾盂内灌注压呈正相关，灌注压越大，细菌及其内毒素被人体吸收的可能性也就越高。因此，降低肾盂灌注压可以降低感染的发生率。RIRS联合可弯曲负压吸引鞘可以较好地解决这个问题。可弯曲负压吸引鞘在配合灌注下可保持肾内低压，负压环境下降低尿源性菌血症发生率。本研究显示, RIRS组感染的发生率为17.86%, 而联合组的感染发生率仅为3.23%, 因此RIRS联合可弯曲负压吸引鞘为治疗感染性肾结石提供了一种新的策略。
钬激光是一种波长为2 140 nm的高能脉冲式激光，其脉冲持续时间为0.25 ms。钬激光的瞬时功率可以达到10~20 kW, 在泌尿外科中广泛用于粉碎多种成分的结石。在RIRS碎石过程中，由于肾盂相对封闭的环境和较长的手术时间，会升高肾盂肾盏内灌注液的温度，造成肾盂肾盏尿路上皮的热损伤。研究[12]显示，肾的热损伤风险与肾盂灌注压和灌注液流速呈反比。因此，降低肾盂灌注压或者提高灌注液流速均可以降低肾的热损伤风险。在RIRS过程中，使用可弯曲负压吸引鞘可以降低肾盂灌注压; 同时，由于连接中心负压或负压吸引器(150~200 mmHg), 并且使用连续性压力泵进行灌注(150~200 mL/min), 联合组的灌注流速较高，可以带走钬激光碎石过程中产生的热量，从而降低RIRS对肾的热损伤。本研究中，联合组在治疗2~3 cm肾结石患者时，需要较少的手术时间，并且即刻清石率和术后4周清石率更高，结石排出更彻底。同时，联合组术后血尿持续时间更短，感染率更低。
综上所述，在处理直径2~3 cm的肾结石时，RIRS联合可弯曲负压吸引鞘的清石率更高，手术时间更短，术后并发症更少，感染发生率更低。
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表 1 qRT-PCR引物序列
基因 上游引物5′-3′ 下游引物5′-3′ miR-1827 CGAGAGCGCAGTGCAGTGC GCAGCAGTACCTAGTGAGCA U6 GCAGTCAGCGCAGTCGATC GACAAGACTCGCTGATCTCG 
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表 2 对照组、息肉组和结直肠癌组Trib3、miR-1827表达水平比较(x±s)[n(%)]
组别 n Trib3高表达 miR-1827 对照组 92 9(9.78)** 1.01±0.23** 息肉组 86 41(47.67)**## 0.69±0.20**## 结直肠癌组 97 84(86.60) 0.39±0.14 与结直肠癌组比较, **P < 0.01;
与对照组比较, ##P < 0.01。
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表 3 Trib3、miR-1827表达水平与结直肠息肉患者临床病理特征的关系[n(%)]
临床病理特征 分类 n Trib3低表达组
(n=45)Trib3高表达组
(n=41)χ2 P miR-1827低表达组
(n=43)miR-1827高表达组
(n=43)χ2 P 性别 男 46 24(52.17) 22(47.83) 0.001 0.976 21(45.65) 25(54.35) 0.748 0.387 女 40 21(52.50) 19(47.50) 22(55.00) 18(45.00) 年龄 < 50岁 41 20(48.78) 21(51.22) 0.395 0.530 20(48.78) 21(51.22) 0.047 0.829 ≥50岁 45 25(55.56) 20(44.44) 23(51.11) 22(48.89) 息肉直径 < 1 cm 36 33(91.67) 3(8.33) 38.417 < 0.001 6(16.67) 30(83.33) 27.520 < 0.001 ≥1 cm 50 12(24.00) 38(76.00) 37(74.00) 13(26.00) 组织病理学分型 腺瘤性 48 11(22.92) 37(77.08) 37.663 < 0.001 38(79.17) 10(20.83) 36.965 < 0.001 增生性 38 34(89.47) 4(10.53) 5(13.16) 33(86.84) 黏膜状态 光滑 28 14(50.00) 14(50.00) 1.159 0.560 12(42.86) 16(57.14) 0.848 0.655 粗糙 28 13(46.43) 15(53.57) 15(53.57) 13(46.43) 糜烂 30 18(60.00) 12(40.00) 16(53.33) 14(46.67) 分叶 无 58 32(55.17) 26(44.83) 0.579 0.447 30(51.72) 28(48.28) 0.212 0.645 有 28 13(46.43) 15(53.57) 13(46.43) 15(53.57) 息肉数目 单发 50 41(82.00) 9(18.00) 42.163 < 0.001 13(26.00) 37(74.00) 27.520 < 0.001 多发 36 4(11.11) 32(88.89) 30(83.33) 6(16.67) 蒂形态 无 37 19(51.35) 18(48.65) 0.025 0.875 18(48.65) 19(51.35) 0.047 0.828 有 49 26(53.06) 23(46.94) 25(51.02) 24(48.98)
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表 4 Trib3、miR-1827表达水平与结直肠癌患者临床病理特征的关系[n(%)]
临床病理特征 分类 n Trib3低表达组
(n=13)Trib3高表达组
(n=84)χ2 P miR-1827低表达组
(n=49)miR-1827高表达组
(n=48)χ2 P 性别 男 53 7(13.21) 46(86.79) 0.004 0.951 28(52.83) 25(47.17) 0.250 0.617 女 44 6(13.64) 38(86.36) 21(47.73) 23(52.27) 年龄 < 50岁 47 8(17.02) 39(82.98) 1.029 0.310 23(48.94) 24(51.06) 0.091 0.763 ≥50岁 50 5(10.00) 45(90.00) 26(52.00) 24(48.00) 肿瘤直径 < 5 cm 45 11(24.44) 34(75.56) 8.819 0.003 6(13.33) 39(86.67) 46.425 < 0.001 ≥5 cm 52 2(3.85) 50(96.15) 43(82.69) 9(17.31) 临床分期 Ⅰ、Ⅱ期 42 10(23.81) 32(76.19) 6.913 0.009 9(21.43) 33(78.557) 27.070 < 0.001 Ⅲ、Ⅳ期 55 3(5.45) 52(94.55) 40(72.73) 15(27.27) 大体类型 溃疡型 48 5(10.42) 43(89.58) 0.734 0.693 19(39.58) 29(60.42) 5.100 0.078 浸润型 24 4(16.67) 20(83.33) 16(66.67) 8(33.33) 隆起型 25 4(16.00) 21(84.00) 14(56.00) 11(44.00) 淋巴结转移 无 56 12(21.43) 44(78.57) 7.354 0.007 13(23.21) 43(76.79) 39.504 < 0.001 有 41 1(2.44) 40(97.56) 36(87.80) 5(12.20) 分化程度 中、高分化 54 11(20.37) 43(79.63) 5.097 0.024 12(22.22) 42(77.78) 39.009 < 0.001 低分化 43 2(4.65) 41(95.35) 37(86.05) 6(13.95) 浸润程度 肌层下 40 5(12.50) 35(87.50) 0.048 0.827 21(52.50) 19(47.50) 0.107 0.743 浆膜下 57 8(14.04) 49(85.96) 28(49.12) 29(50.88)
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表 5 Trib3、miR-1827在结直肠息肉组织中的相关性
结直肠息肉组织 miR-1827高表达(n=43) miR-1827低表达(n=43) r P Trib3高表达(n=41) 13 28 -0.349 0.001 Trib3低表达(n=45) 30 15
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表 6 Trib3、miR-1827在结直肠癌组织中的相关性
结直肠癌组织 miR-1827高表达(n=48) miR-1827低表达(n=49) r P Trib3高表达(n=84) 35 49 -0.397 < 0.001 Trib3低表达(n=13) 13 0
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表 7 影响结直肠息肉患者治疗效果的多因素COX回归分析
影响因素 B SE Wald P OR 95%CI Trib3 1.000 0.332 9.077 0.003 2.719 1.418~5.212 miR-1827 -0.127 0.044 8.291 0.004 0.881 0.808~0.960 息肉直径 0.120 0.309 0.150 0.699 1.127 0.615~2.065 组织病理学分型 0.099 0.182 0.296 0.587 1.104 0.773~1.577 息肉数目 0.091 0.110 0.681 0.409 1.095 0.883~1.358
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表 8 影响结直肠癌患者死亡的多因素COX回归分析
影响因素 B SE Wald P OR 95%CI Trib3 1.045 0.304 11.813 0.001 2.843 1.567~5.159 miR-1827 -0.231 0.076 9.212 0.002 0.794 0.684~0.922 肿瘤直径 0.131 0.213 0.378 0.538 1.140 0.751~1.731 临床分期 1.006 0.274 13.484 < 0.001 2.735 1.599~4.679 淋巴结转移 0.121 0.118 1.057 0.304 1.129 0.896~1.423 分化程度 0.127 0.109 1.350 0.245 1.135 0.917~1.405
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