罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制

曹芹; 王丹

doi:10.7619/jcmp.20211771

罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制

曹芹¹,
王丹^2, ,

1.
重庆市第九人民医院麻醉科, 重庆, 400700
2.
重庆市第九人民医院消化内科, 重庆, 400700

详细信息

通讯作者:
王丹, E-mail: 57994844@qq.com

中图分类号: R753.2;R446
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出版历程
- 收稿日期: 2021-04-26
- 网络出版日期: 2021-11-15
- 发布日期: 2021-10-27

Mechanism of ropivacaine inhibiting the proliferation, migration and invasion of gastric cancer cell NCI-N87 through Wnt signaling pathway

CAO Qin¹,
WANG Dan^2, ,

1.
Department of Anesthesiology, Chongqing Ninth People's Hospital, Chongqing, 400700
2.
Department of Gastroenterology, Chongqing Ninth People's Hospital, Chongqing, 400700

摘要

摘要:
目的探讨罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制。
方法采用罗哌卡因细胞培养液培养胃癌细胞NCI-N87，并分为对照组（0 μg/mL罗哌卡因）、ROP-L组（160 μg/mL罗哌卡因）、ROP-M组（320 μg/mL罗哌卡因）、ROP-H组（640 μg/mL罗哌卡因）、ROP-H+Licl（640 μg/mL罗哌卡因、Wnt信号激活剂Licl）组。MTT法检测细胞增殖活性；Transwell小室检测细胞迁移和侵袭的能力变化；Western blot方法分析基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、β-连环蛋白（β-catenin）、钙黏蛋白（N-cadherin）、Wnt1的蛋白表达水平。
结果与对照组比较，ROP-L组、ROP-M组、ROP-H组胃癌细胞迁移和侵袭数目逐渐降低，增殖活性降低，细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平逐步减少，细胞中E-cadherin蛋白表达水平逐步增加，N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白表达水平逐渐降低（P < 0.05）。与ROP-H组比较，ROP-H+Licl组胃癌细胞迁移数目和侵袭数目升高，MMP-9、MMP-2、N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白水平升高，E-cadherin蛋白水平降低（P < 0.05）。
结论罗哌卡因通过下调Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）。
- 胃癌细胞 /
- 罗哌卡因 /
- 迁移 /
- 侵袭 /
- Wnt信号通路 /
- 上皮间质转化
Abstract:
Objective To investigate the mechanism of ropivacaine inhibiting the proliferation, migration and invasion of gastric cancer cell NCI-N87 through the Wnt signaling pathway.
Methods Gastric cancer cells NCI-N87 were cultured by ropivacaine cell culture fluid and were divided into control group (0 μg/mL ropivacaine), ROP-L group (160 μg/mL ropivacaine), ROP-M group (320 μg/mL ropivacaine), ROP-H group (640 μg/mL ropivacaine) and ROP-H+Licl (640 μg/mL ropivacaine, Wnt signal activator Licl) group. MTT assay was used to detect cell proliferation activity. Transwell assay was used to detect the changes in ability of cell migration and invasion. The protein expression levels of matrix metalloproteinase 9 (MMP-9), matrix metalloproteinase 2 (MMP-2), E-cadherin, β-catenin, N-cadherin and Wnt1 were analyzed by western blot.
Results Compared with the control group, the number of migration and invasion of gastric cancer cells in the ROP-L, ROP-M, and ROP-H groups gradually decreased, the proliferation activity decreased, the expression levels of MMP-2 and MMP-9 proteins in the cells gradually decreased, and the protein expression level of E-cadherin in the cells gradually increased, and the N-cadherin, Wnt1, and β-catenin protein expression levels gradually decreased (P < 0.05). Compared with the ROP-H group, the number of migration and invasion of gastric cancer cells in the ROP-H+Licl group increased, the protein levels of MMP-9, MMP-2, N-cadherin, Wnt1 and β-catenin increased, and the protein level of E-cadherin decreased (P < 0.05).
Conclusion Ropivacaine inhibits the proliferation, migration, invasion and epithelial-mesenchymal transition (EMT) of gastric cancer cell NCI-N87 by down-regulating the Wnt signaling pathway.
- gastric cancer /
- ropivacaine /
- migration /
- invasion /
- Wnt signaling pathway /
- epithelial-mesenchymal transition

HTML全文

胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤，发病早期没有典型的临床特征，很多患者在确诊时已经发生了转移，错过了最佳的治疗时机^[1]。罗哌卡因具有镇静和麻醉作用，是首个纯左旋长效酰胺类的麻醉药，罗哌卡因可通过阻断神经细胞中的钠离子通道，抑制钠离子进入神经纤维细胞膜中，进而阻滞神经纤维内的信号传导^[2]。研究^[3-4]发现，罗哌卡因具有抗肿瘤作用，罗哌卡因能够抑制宫颈癌、肝癌等肿瘤细胞增殖。罗哌卡因处理后的食管癌细胞迁移能力降低^[5]。已有实验^[6]显示，胃癌细胞经罗哌卡因处理后细胞增殖能力下降，划痕愈合能力降低，但目前对罗哌卡因通过何种机制发挥抗胃癌作用还不明确。

Wnt属于分泌蛋白，可通过作用于细胞膜上的受体影响细胞内信号传导，进而调控下游基因的表达，参与细胞迁移、分化、增殖等过程^[7]。目前在人以及鼠体内发现了Wnt的19个成员, β-catenin和Wnt1是Wnt信号通路的关键因子，二者表达水平与Wnt信号通路激活水平有关^[8]。研究^[9]发现，Wnt在胃癌中过度激活，而抑制Wnt可减弱细胞恶性增殖和转移能力。本研究探讨罗哌卡因调控Wnt信号抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制，为明确罗哌卡因抗肿瘤机制提供理论依据。

1. 材料与方法

1.1 材料

基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抗体购自武汉博士德生物工程有限公司; 胃癌细胞NCI-N87购自美国ATCC; 基质金属蛋白酶-2(MMP-2)抗体购自美国Cell Signaling Technology; Wnt1抗体购自美国Abcam; β-连环蛋白(β-catenin)抗体购自南京建成生物工程研究所; 罗哌卡因购自宜昌人福药业(国药准字H20103636); 上皮钙黏蛋白(E-cadherin)抗体购自北京义翘神州科技股份有限公司; BCA蛋白浓度检测试剂盒购自北京蓝博斯特生物技术有限公司; 钙黏蛋白(N-cadherin)抗体购自美国Proteintech。

1.2 实验分组

用0、160、320、640 μg/mL罗哌卡因细胞培养液培养胃癌细胞，记为对照组、ROP-L组、ROP-M组、ROP-H组; 用含有25 mmol/L的Wnt信号激活剂Licl和640 μg/mL罗哌卡因的细胞培养液培养胃癌细胞，记为ROP-H+Licl组，以ROP-H组为参照。

1.3 MTT检测罗哌卡因对胃癌细胞增殖影响

胃癌细胞培养在含有10%胎牛血清的DMEM中进行，细胞培养参数为: 37 ℃, 5% CO₂培养箱。将培养至对数生长期的胃癌细胞按照每个孔内添加4 000个细胞接种到96孔细胞培养板中，每个孔内添加100 μL的细胞培养液，细胞培养过夜后，分别在细胞中添加罗哌卡因，使罗哌卡因终浓度为0、40、80、160、320、640 μg/mL, 细胞培养24 h后，在每个孔内添加10 μL的MTT溶液，继续放在37℃的培养箱内孵育培养2 h。弃掉孔中的液体，继续添加150 μL的二甲基亚砜溶液，孵育10 min后，立即用酶标仪测定每个孔在450 nm的吸光度值(OD)。以OD值表示细胞增殖活性。

1.4 Transwell小室检测细胞迁移和侵袭

细胞迁移实验: 对照组、ROP-L、ROP-M、ROP-H、ROP-H+Licl组细胞分别用无血清细胞培养液制备成单细胞悬浮液。每个检测样品吸取0.2 mL至Transwell小室的上室内，同时吸取0.6 mL的含胎牛血清的细胞培养液至下室内，置于培养箱内孵育24 h。将小室取出，用棉签擦掉基质胶以及没穿膜的细胞，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次，添加95%的乙醇固定15 min, 用结晶紫染色。随机选择5个视野，在显微镜下统计迁移数量，平均值为结果。

细胞侵袭实验具体操作如下: 对照组、ROP-L、ROP-M、ROP-H、ROP-H+Licl组细胞分别用无血清细胞培养液制备成单细胞悬浮液。把matrigel放在4 ℃融化，吸取50 μg的matrigel添加到95 μL的无血清细胞培养液内，将稀释以后的matrigel添加到Transwell小室内，转移到37℃孵育1 h。分别取0.2 mL的培养液加入到Transwell小室的上室内，同时吸取0.6 mL的含胎牛血清的细胞培养液至下室内，置于培养箱内孵育2 d。将小室取出，利用棉签擦掉基质胶以及没穿膜的细胞，用PBS洗涤2次，添加95%的乙醇稳固15 min, 随后使用结晶紫进行染色。任意选取5个角度，使用显微镜完成侵袭数目计算，结果取平均值。

1.5 Western blot检测细胞中MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白表达

对照组、ROP-L、ROP-M、ROP-H、ROP-H+Licl组细胞培养24 h以后，分别在细胞中加入含有1% PMSF的RIPA溶液，置于冰上裂解30 min, 转移至离心管内，以4 ℃、12 000 g离心15 min, 小心吸取上清，分装，以BCA方法测定蛋白浓度。SDS-PAGE凝胶电泳采用10%分离胶、5%浓缩胶。把2×Loading Buffer添加到蛋白溶液中，在100 ℃的前提下孵化5 min。每个上样孔中均分别加入30 μg蛋白样品，电泳使用70 V的电压，观察染料到达分离胶时，调整电压为100 V继续电泳，观察溴酚蓝到达凝胶的下端时，终止电泳。把凝胶取出，裁剪合适大小的NC膜，放在转移缓冲液中浸泡备用。设置200 mA恒流、冰上转膜50 min。把NC膜置于5%牛血清白蛋白内，于室温环境孵育2 h。将1∶ 1 000一抗溶液稀释后放入NC膜，放在4 ℃孵化一整晚。最后将二抗溶液1∶ 4 000稀释后浸泡NC膜，放在37 ℃结合2 h。按照ECL方法显色。将GAPDH设置为参照，分析条带的灰度值，以灰度值计算蛋白表达水平。

1.6 统计学分析

本研究中，将所有收集的数据均采用SPSS 21.0统计学软件进行分析，计量数据用均数±标准差(x±s)表示，两组间数据比较行t检验，用单因素方差分析多组差异, P < 0.05为差异有统计学意义。

2. 结果

2.1 罗哌卡因对胃癌细胞增殖影响

相较于0、40、80 μg/mL罗哌卡因处理后的胃癌细胞增殖活性[(0.67±0.08)、(0.68±0.06)、(0.65±0.05)], 160、320、640 μg/mL罗哌卡因处理后的胃癌细胞增殖活性降低[(0.50±0.04)、(0.42±0.03)、(0.35±0.03)]。选择160、320、640 μg/mL的罗哌卡因进行后续研究。

2.2 罗哌卡因对胃癌细胞迁移和侵袭影响

与对照组比较, ROP-L、ROP-M、ROP-H组胃癌细胞迁移和侵袭数目逐渐减少以及细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均逐渐降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。罗哌卡因抑制胃癌细胞的迁移和侵袭，见图 1、表 1。

图 1 Western blot方法测定罗哌卡因处理后的胃癌细胞中MMP-9、MMP-2蛋白表达变化

A: 胃癌细胞NCI-N87的迁移侵袭(放大倍数200倍); B: MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达

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表 1 罗哌卡因处理后的胃癌细胞迁移数目、侵袭数目和细胞中MMP-9、MMP-2蛋白水平(x±s)

组别	迁移数目/个	侵袭数目/个	MMP-9	MMP-2
对照组	256.39±12.05	192.52±16.37	0.76±0.07	0.79±0.06
ROP-L组	210.36±16.47^*	142.81±10.19^*	0.53±0.05^*	0.58±0.06^*
ROP-M组	165.95±15.42^*#	110.34±9.85^*#	0.32±0.03^*#	0.35±0.05^*#
ROP-H组	98.65±10.28^*#△	73.56±6.51^*#△	0.24±0.02^*#△	0.23±0.02^*#△
与对照组比较, * P < 0.05; 与ROP-L组比较, #P < 0.05; 与ROP-M组比较, △ P < 0.05。

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2.3 罗哌卡因对胃癌细胞上皮间质转化(EMT) 影响

与对照组比较, ROP-L组、ROP-M组、ROP-H组胃癌细胞中E-cadherin蛋白表达水平逐渐升高, N-cadherin蛋白表达水平逐渐降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。罗哌卡因抑制胃癌细胞的EMT, 见图 2、表 2。

图 2 Western blot检测罗哌卡因处理后的胃癌细胞中E-cadherin、N-cadherin蛋白表达变化

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表 2 罗哌卡因处理后的胃癌细胞E-cadherin、N-cadherin蛋白水平(x±s)

组别	E-cadherin	N-cadherin
对照组	0.29±0.03	0.69±0.07
ROP-L组	0.37±0.02^*	0.56±0.05^*
ROP-M组	0.49±0.05^*#	0.34±0.03^*#
ROP-H组	0.65±0.04^*#△	0.24±0.03^*#△
与对照组比较, * P < 0.05; 与ROP-L组比较, #P < 0.05; 与ROP-M组比较, △P < 0.05。

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2.4 罗哌卡因对胃癌细胞中Wnt信号通路影响

与对照组比较, ROP-L组、ROP-M组、ROP-H组胃癌细胞中Wnt1、β-catenin蛋白表达水平逐渐降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。罗哌卡因抑制胃癌细胞的Wnt信号通路，见图 3、表 3。

图 3 Western blot检测罗哌卡因处理后的胃癌细胞中Wnt1、β-catenin蛋白表达变化

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表 3 罗哌卡因处理后的胃癌细胞Wnt1、β-catenin蛋白水平(x±s)

组别	Wnt1	β-catenin
对照组	0.95±0.10	0.92±0.08
ROP-L组	0.65±0.06^*	0.68±0.07^*
ROP-M组	0.41±0.04^*#	0.38±0.04^*#
ROP-H组	0.25±0.03^*#△	0.24±0.02^*#△
与对照组比较, * P < 0.05; 与ROP-L组比较, #P < 0.05; 与ROP-M组比较, △P < 0.05。

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2.5 Wnt信号激活剂Licl对罗哌卡因抑制胃癌细胞Wnt信号通路的作用

与ROP-H组比较, ROP-H+Licl组胃癌细胞中Wnt1、β-catenin蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P < 0.05)。见图 4、表 4。

图 4 Western blot检测Wnt信号激活剂Licl和罗哌卡因处理后的胃癌细胞中Wnt1、β-catenin蛋白表达变化

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表 4 Wnt信号激活剂Licl和罗哌卡因处理后的胃癌细胞Wnt1、β-catenin蛋白水平(x±s)

组别	Wnt1	β-catenin
ROP-H组	0.24±0.05	0.25±0.03
ROP-H+Licl组	0.67±0.06^*	0.64±0.05^*
与ROP-H组比较, * P < 0.05。

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2.6 激活Wnt信号对罗哌卡因影响胃癌细胞迁移、侵袭和EMT作用

与ROP-H比较, ROP-H+Licl组胃癌细胞迁移数目和侵袭数目升高, MMP-9、MMP-2、N-cadherin蛋白水平升高, E-cadherin蛋白水平降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。见图 5、表 5。

图 5 Western blot检测Wnt信号激活剂Licl和罗哌卡因处理后的胃癌细胞中MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达变化

A: 胃癌细胞NCI-N87的迁移侵袭(放大倍数200倍); B: MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。

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表 5 Wnt信号激活剂Licl和罗哌卡因处理后的胃癌细胞增殖活性、侵袭数目、迁移数目和MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin蛋白水平(x±s)

组别	OD值	迁移数目/个	侵袭数目/个	MMP-9	MMP-2	E-cadherin	N-cadherin
ROP-H组	0.34±0.05	97.68±7.44	74.36±6.23	0.27±0.03	0.25±0.04	0.64±0.05	0.26±0.05
ROP-H+Licl组	0.47±0.04^*	167.24±15.64^*	138.69±12.57^*	0.46±0.05^*	0.40±0.05^*	0.28±0.04^*	0.43±0.05^*
与ROP-H比较, * P < 0.05

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3. 讨论

罗哌卡因是纯S(-)型镜像体结构，为常见的临床麻醉药。近些年来，罗哌卡因在肿瘤中的作用引起广泛重视^[10]。有实验^[3-5]发现，罗哌卡因对宫颈癌、肝癌、食管癌等多种肿瘤细胞有抑制作用，且罗哌卡因还可在体外抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭。罗哌卡因对胃癌也有抑制作用，其处理后的胃癌细胞增殖能力降低，划痕愈合能力下降^{[6, 11]}。本研究发现，罗哌卡因可降低胃癌细胞增殖活性，抑制胃癌细胞迁移和侵袭，这说明罗哌卡因有抗胃癌转移的作用，与既往研究结果相符合。

肿瘤的转移过程十分复杂，肿瘤细胞在转移至新的组织和器官时，能够合成大量的细胞外基质降解酶，破坏细胞外基质结构，为肿瘤的转移提供条件^[12-13]。基质金属蛋白酶是常见的细胞外基质降解酶，其蛋白成员很多，分别能够将不同的细胞外基质组分降解，为肿瘤的转移提供条件^[14]。基质金属蛋白酶家族成员有MMP-2和MMP-9, 基质金属蛋白酶在肿瘤中的表达有所增加后，会加速肿瘤细胞的迁移^[15]。EMT是指细胞上皮特征逐渐消失而间质细胞特征逐渐明显的过程，在胚胎发育、组织生长等过程中均有EMT现象^[16]。E-cadherin是上皮细胞标志蛋白，其在EMT过程中表达下调。N-cadherin是间质细胞标志蛋白，其表达水平升高标志着EMT水平增加^[17]。肿瘤相关研究^[18]显示, EMT是肿瘤转移的早期标志事件，肿瘤细胞EMT后迁移和侵袭能力增加。本研究显示，胃癌细胞经罗哌卡因处理后, MMP-9和MMP-2蛋白表达水平均有所降低, E-cadherin蛋白表达水平减少, N-cadherin蛋白表达水平降低，这说明罗哌卡因阻滞胃癌细胞EMT, 制止胃癌细胞的转移和入侵，这与细胞侵袭的研究结果相符。

虽然已经明确了罗哌卡因具有抗肿瘤作用，但目前尚不清楚罗哌卡因的作用机制。既往实验^{[3, 5, 11]}发现，罗哌卡因抗肿瘤作用与信号通路如JNK、ERK、STAT3等有关。本研究发现，罗哌卡因处理后的胃癌细胞中Wnt1、β-catenin蛋白水平降低。Wnt1、β-catenin是Wnt信号通路的关键因子，二者表达水平升高后标志着Wnt信号通路被激活^[19]。Wnt是在人体组织中具有多种生物学作用的信号通路，在能量代谢、氧化应激、炎症、细胞增殖等多个生理过程中发挥作用^[20]。研究^[21-22]证明肿瘤组织中Wnt信号过度激活，Wnt信号可激活细胞增殖、迁移，促进肿瘤进展。Wnt激活增加胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和EMT水平，而抑制Wnt信号可降低胃癌细胞生长和转移能力^[23]。本研究显示，罗哌卡因降低胃癌细胞中Wnt激活水平，并且Wnt信号激活剂可逆转罗哌卡因对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭以及EMT的作用，提示罗哌卡因通过Wnt发挥作用。

综上所述，罗哌卡因通过下调Wnt激活水平抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT, 可为后续研究罗哌卡因抗胃癌作用机制提供参考。此外，罗哌卡因通过何种靶向机制影响Wnt进而调控胃癌还有待进一步研究。

图 1 Western blot方法测定罗哌卡因处理后的胃癌细胞中MMP-9、MMP-2蛋白表达变化

A: 胃癌细胞NCI-N87的迁移侵袭(放大倍数200倍); B: MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达

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图 2 Western blot检测罗哌卡因处理后的胃癌细胞中E-cadherin、N-cadherin蛋白表达变化

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图 3 Western blot检测罗哌卡因处理后的胃癌细胞中Wnt1、β-catenin蛋白表达变化

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图 4 Western blot检测Wnt信号激活剂Licl和罗哌卡因处理后的胃癌细胞中Wnt1、β-catenin蛋白表达变化

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图 5 Western blot检测Wnt信号激活剂Licl和罗哌卡因处理后的胃癌细胞中MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达变化

A: 胃癌细胞NCI-N87的迁移侵袭(放大倍数200倍); B: MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。

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表 1 罗哌卡因处理后的胃癌细胞迁移数目、侵袭数目和细胞中MMP-9、MMP-2蛋白水平(x±s)

组别	迁移数目/个	侵袭数目/个	MMP-9	MMP-2
对照组	256.39±12.05	192.52±16.37	0.76±0.07	0.79±0.06
ROP-L组	210.36±16.47^*	142.81±10.19^*	0.53±0.05^*	0.58±0.06^*
ROP-M组	165.95±15.42^*#	110.34±9.85^*#	0.32±0.03^*#	0.35±0.05^*#
ROP-H组	98.65±10.28^*#△	73.56±6.51^*#△	0.24±0.02^*#△	0.23±0.02^*#△
与对照组比较, * P < 0.05; 与ROP-L组比较, #P < 0.05; 与ROP-M组比较, △ P < 0.05。

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表 2 罗哌卡因处理后的胃癌细胞E-cadherin、N-cadherin蛋白水平(x±s)

组别	E-cadherin	N-cadherin
对照组	0.29±0.03	0.69±0.07
ROP-L组	0.37±0.02^*	0.56±0.05^*
ROP-M组	0.49±0.05^*#	0.34±0.03^*#
ROP-H组	0.65±0.04^*#△	0.24±0.03^*#△
与对照组比较, * P < 0.05; 与ROP-L组比较, #P < 0.05; 与ROP-M组比较, △P < 0.05。

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表 3 罗哌卡因处理后的胃癌细胞Wnt1、β-catenin蛋白水平(x±s)

组别	Wnt1	β-catenin
对照组	0.95±0.10	0.92±0.08
ROP-L组	0.65±0.06^*	0.68±0.07^*
ROP-M组	0.41±0.04^*#	0.38±0.04^*#
ROP-H组	0.25±0.03^*#△	0.24±0.02^*#△
与对照组比较, * P < 0.05; 与ROP-L组比较, #P < 0.05; 与ROP-M组比较, △P < 0.05。

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表 4 Wnt信号激活剂Licl和罗哌卡因处理后的胃癌细胞Wnt1、β-catenin蛋白水平(x±s)

组别	Wnt1	β-catenin
ROP-H组	0.24±0.05	0.25±0.03
ROP-H+Licl组	0.67±0.06^*	0.64±0.05^*
与ROP-H组比较, * P < 0.05。

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表 5 Wnt信号激活剂Licl和罗哌卡因处理后的胃癌细胞增殖活性、侵袭数目、迁移数目和MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin蛋白水平(x±s)

组别	OD值	迁移数目/个	侵袭数目/个	MMP-9	MMP-2	E-cadherin	N-cadherin
ROP-H组	0.34±0.05	97.68±7.44	74.36±6.23	0.27±0.03	0.25±0.04	0.64±0.05	0.26±0.05
ROP-H+Licl组	0.47±0.04^*	167.24±15.64^*	138.69±12.57^*	0.46±0.05^*	0.40±0.05^*	0.28±0.04^*	0.43±0.05^*
与ROP-H比较, * P < 0.05

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参考文献(23)

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施引文献(4)

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图(5) / 表(5)

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1. 材料与方法
1.1 材料
1.2 实验分组
1.3 MTT检测罗哌卡因对胃癌细胞增殖影响
1.4 Transwell小室检测细胞迁移和侵袭
1.5 Western blot检测细胞中MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白表达
1.6 统计学分析
2. 结果
2.1 罗哌卡因对胃癌细胞增殖影响
2.2 罗哌卡因对胃癌细胞迁移和侵袭影响
2.3 罗哌卡因对胃癌细胞上皮间质转化(EMT) 影响
2.4 罗哌卡因对胃癌细胞中Wnt信号通路影响
2.5 Wnt信号激活剂Licl对罗哌卡因抑制胃癌细胞Wnt信号通路的作用
2.6 激活Wnt信号对罗哌卡因影响胃癌细胞迁移、侵袭和EMT作用
3. 讨论

1. 材料与方法
1.1 材料
1.2 实验分组
1.3 MTT检测罗哌卡因对胃癌细胞增殖影响
1.4 Transwell小室检测细胞迁移和侵袭
1.5 Western blot检测细胞中MMP-9、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白表达
1.6 统计学分析
2. 结果
2.1 罗哌卡因对胃癌细胞增殖影响
2.2 罗哌卡因对胃癌细胞迁移和侵袭影响
2.3 罗哌卡因对胃癌细胞上皮间质转化(EMT) 影响
2.4 罗哌卡因对胃癌细胞中Wnt信号通路影响
2.5 Wnt信号激活剂Licl对罗哌卡因抑制胃癌细胞Wnt信号通路的作用
2.6 激活Wnt信号对罗哌卡因影响胃癌细胞迁移、侵袭和EMT作用
3. 讨论

参考文献(23)

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罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制

通讯作者: 王丹, E-mail: 57994844@qq.com

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