重组人骨形态发生蛋白10的表达纯化及其心脏保护功能

王若璋; 金坚

doi:10.7619/jcmp.201921001

重组人骨形态发生蛋白10的表达纯化及其心脏保护功能

王若璋,
金坚

江南大学药学院, 江苏无锡, 214122

基金项目:

国家自然科学基金 31401237

详细信息

通讯作者:
金坚

中图分类号: R541.6
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出版历程
- 收稿日期: 2019-04-15
- 网络出版日期: 2021-02-28
- 发布日期: 2019-11-14

Expression and purification of recombinant human bone morphogenetic protein 10 and it cardiac protection effect

School of Pharmacy, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu, 214122

摘要

摘要:
目的验证重组人骨形态发生蛋白10(rhBMP10)的心脏保护作用。
方法使用CHO细胞表达并纯化rhBMP10; 利用多柔比星多次给药构建小鼠心力衰竭模型; 使用超声心动图、TUNEL染色等方法评价小鼠心功能变化和心肌细胞凋亡情况。
结果本研究成功表达了具有生物活性的rhBMP10; 多柔比星造模小鼠的心功能受到严重损伤; 心肌细胞凋亡比例显著升高，而rhBMP10处理的小鼠心脏功能和心肌细胞未受到显著影响。
结论 rhBMP10在减轻多柔比星引起的心脏损伤方面具有积极作用。
- 心力衰竭 /
- 心脏毒性 /
- 重组人骨形态发生蛋白10 /
- 多柔比星 /
- 药理学
Abstract:
Objective To verify the cardiac protection effect of recombinant human bone morphogenetic protein 10 (rhBMP10).
Methods The rhBMP10 was expressed and purified by CHO cells, heart failure model was established by repeated administration of doxorubicin, and cardiac function and apoptosis were evaluated by echocardiography and TUNEL staining.
Results In this study, rhBMP10 with biological activity was successfully expressed. Cardiac function of doxorubicin-induced mice was severely damaged. Apoptotic rate of cardiomyocytes significantly increased, and cardiac function and cardiomyocytes of rhBMP10-treated mice were not affected significantly.
Conclusion The rhBMP10 has a positive effect on reducing heart damage caused by doxorubicin.
- heart failure /
- cardiotoxicity /
- recombinant human bone morphogenetic protein 10 /
- doxorubicin /
- pharmacology

HTML全文

图 1 rhBMP10表达细胞株构建免疫印迹图

A: 第1次克隆筛选结果; B: 第2次克隆筛选结果; C: 单克隆化后的表达情况

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图 2 CHO-BMP10细胞株在3 L摇瓶流加培养过程中的生长情况

A: 细胞存活率; B: 细胞密度; C: 细胞直径

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图 3 CHO-BMP10细胞株在3 L摇瓶流加培养过程中的产物累积情况(Western blot)

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图 4 rhBMP10的纯化结果图

A: Q柱纯化色谱图(UV280); B: Q柱纯化色谱图(B液比例); C: Gel filtration柱纯化运行图谱

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图 5 收集洗脱峰的考马斯亮蓝染色图

A: Q柱纯化收集洗脱峰的考马斯亮蓝染色图, rhBMP10为含有250 mmol/L NaCl的50 mmol/LNaPB洗脱峰, BMP10(R&D)为从R&D公司购买的对照品; B: Gel filtration柱纯化收集洗脱峰的考马斯亮蓝染色图, 1为~12 mL洗脱峰，2为~19 mL洗脱峰。

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图 6 超声心动图检查结果

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图 7 TUNEL检测结果图(标尺20 μm)

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表 1 融合PCR引物

引物名称	序列
FL-5′	CGAAGAATTCCACCATGGGCTCTCTGGT CCTGACAC
FL-3′	ATTTGCGGCCGCCTATCTACAGCCACA TTCGGAGACG
MID-5′	ATCCAGGCCTTGGTCCACCTCAAGAG TTCCCAGAAAGCTTCCAAAGCCT
MID-3′	AGGCTTTGGAAGCTTTCTGGGAACTCTT GAGGTGGACCAAGGCCTGGAT

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表 2 各组血清心肌肌钙蛋白Ⅰ、肌红蛋白水平比较(x±s)

指标	Saline组	BMP10组	DOX组	DOX+BMP10组
cTnI/(ng/L)	98.8±5.9^*	112.3±5.8	138.5±23.8	106.7±8.0^*
Mb/(ng/mL)	157.9±19.2^**	150.9±40.3	292.2±20.4	175.4±21.8^**
cTnI: 心肌肌钙蛋白Ⅰ; Mb: 肌红蛋白。与DOX组比较, P < 0.05, *P < 0.01。

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