细胞色素P4502C9*8与CYP2C9*27慢病毒表达载体的构建及在HEK239T细胞中的稳定表达

廖凯; 刘勇; 万子衿; 李巍

doi:10.7619/jcmp.201807001

细胞色素P4502C98与CYP2C927慢病毒表达载体的构建及在HEK239T细胞中的稳定表达

1.
扬州大学医学院,江苏扬州,225001;
2.
江苏省中西医结合老年病防治重点实验室,江苏扬州,225001;
3.
大连理工大学生命与医药学院,辽宁盘锦,124221;
4.
扬州大学医学院,江苏扬州,225001

基金项目: 江苏省高校教育厅自然基金项目，江苏省扬州市自然科学基金，扬州大学创新培育项目。

详细信息

中图分类号: R329.2
计量
- 文章访问数: 288
- HTML全文浏览量: 27
- PDF下载量: 6
出版历程

Construction of cytochrome P450 2C9 * 8 and CYP2C9 * 27 lentiviral expression plasmid and stable express in HEK293 cells

摘要

摘要: 目的构建人细胞色素P450 2C9(CYP2C9)及突变体CYP2C9*8与CYP2C9* 27的慢病毒表达质粒,并于HEK293T细胞中稳定表达.方法反转录人肝总RNA获得cDNA,PCR扩增获得CYP2C9编码序列,并克隆至载体MigR1上,获得慢病毒表达重组质粒MigR1-CYP2C9.以该质粒为模板,重叠PCR方法分别引入449G＞A与449G＞T点突变,并分别克隆至MigR1,获得MigR1-CYP2C9*8与MigR1-CYP2C9* 27慢病毒表达质粒.在HEK 293T细胞中进行病毒包装,并采用获得的慢病毒感染HEK293细胞,经流式分选和单克隆挑取获得稳定表达CYP2C9、CYP2C9*8与CYP2C9* 27的细胞,命名为293T-2C9、293T-2C9*8与293T-2C9* 27.实时定量PCR(qRT-PCR)与Western blot检测胞内CYP2C9表达.采用CYP2C9的特异性底物双氯芬酸对CYP2C9的活性进行评价.结果成功构建MigR1-CYP2C9、MigR1-CYP2C9*8与MigR1-CYP2C9* 27表达载体.采用构建病毒感染获得的单克隆细胞293T-2C9、293T-2C9 * 8与293T-2C9* 27在30代后荧光显微镜下观察可见绿色荧光表达率在100％,qRT-PCR与Western blot均表明有目标分子表达.提取自这三株细胞的微粒体均可催化双氯芬酸代谢为4-羟基双氯芬酸.结论成功构建稳定表达CYP2C9、CYP2C9*8与CYP2C9* 27人源化细胞模型,该方法构建的细胞可用于CYP2C9*8与*27两个突变体的功能研究.
- 细胞色素P4502C9(CYP2C9) /
- CYP2C9*8 /
- CYP2C9*27 /
- 慢病毒 /
- HEK293T
- cytochrome P4502C9 (CYP2C9) /
- CYP2C9 * 8 /
- CYP2C9 * 27 /
- lentivirus /
- HEK293T

HTML全文

参考文献(0)

施引文献(3)

期刊类型引用(3)

1.	黄惠榕，吴翠娟，刘磊，刘晴，李静，郑赛玉，肖彬新. 火龙罐疗法治疗后循环缺血性眩晕疗效观察. 福建中医药. 2024(11): 50-52+55 . 百度学术
2.	鞠惠，王湘云，李玲，池君莹，葛磊. 虚拟现实技术在老年慢病中的应用进展. 牡丹江医学院学报. 2023(06): 128-131 . 百度学术
3.	徐檬，赵斐斐. 虚拟现实技术在前庭康复护理中的研究进展. 全科护理. 2022(36): 5081-5083 . 百度学术

其他类型引用(0)

资源附件(0)

计量

文章访问数: 288
HTML全文浏览量: 27
PDF下载量: 6
被引次数: 3

细胞色素P4502C9*8与CYP2C9*27慢病毒表达载体的构建及在HEK239T细胞中的稳定表达

计量

出版历程

Construction of cytochrome P450 2C9 * 8 and CYP2C9 * 27 lentiviral expression plasmid and stable express in HEK293 cells

期刊类型引用(3)

其他类型引用(0)

计量

出版历程

目录

细胞色素P4502C98与CYP2C927慢病毒表达载体的构建及在HEK239T细胞中的稳定表达